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蛋白纯化常见问题(一)
  • 发布日期:2022-12-15     信息来源:      浏览次数:283
    • 那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下蛋白纯化常见问题(一)。
      Q:如何去除样品中的 DNA/RNA 等核酸杂质污染?
      A:延长超声时间以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同时消化 DNA 和 RNA。如果来源是大肠杆菌裂解液,含有大量的DNA,可以用链霉素沉淀等方法,预先去除大量的 DNA。
      通过层析方法去除 :由于核酸带负电,在阴离子柱上会结合或阳离子柱上流穿,也可以有效去除核酸。
      去除填料上结合的核酸 :一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 对核酸的去除效果较好。如果核酸的吸附过强,会采用强烈的方法,3M NaCl可去除靠静电吸附的核酸,然后用 1M NaOH分解核酸,之后再用 3M NaCl 清洗。

      Q:柱子有色素如何去除?
      A:
      色素性质较复杂,可以根据填料的耐受情况,尝试使用高盐、NaOH、有机溶剂(如 30% 异丙醇或乙醇)或酸(如 0.01 M HCl)处理,*好将填料拆出,分别浸泡在不同试剂中。
      也可以考虑使用混合试剂进行处理,例如:通过混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl,对于和阴离子交换等介质紧密结合的化合物,通常很有效;或者1 M NaOH混合1-2 M 盐;可以耐受有机溶剂的情况下,尝试1 M NaOH混合20-30%的异丙醇;根据色素的不同性质,也可以尝试不同的去污剂,注意避免操作中产生气泡。
      如果去除不掉,可以定期把色素污染部分的填料去除,或验证是否对于样品纯化造成影响。

      Q:柱子堵了、超压如何处理?
      A:可能原因 :缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞 ;流速过快、流动相粘度 ( 如乙醇等 ) 过高、温度过低。
      建议处理方法 :首先将柱子卸下来,确定是系统还是柱子堵了。如果是柱子堵了 :参考说明书 CIP 操作进行清洁 ;更换层析柱顶端滤膜或超声清洗 (Hitrap,HiPrep 与 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸换膜 ) ;必要时移除层析柱顶端 2-3mm 凝胶,调节 Adaptor消除顶端死体积。部分预装柱,也可以将填料倒出,去除板结或碎填料后,重新装填。测定柱效或重复之前做过的样品。后续注意样品前处理(包括上柱子前的离心或过滤处理、优化利于样品稳定存在的缓冲液条件、核酸等粘稠杂质的去除等)以及层析柱的日常维护。

      以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于蛋白纯化常见问题(一)。
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