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蛋白纯化折腾半个月没结果,快放假了老板才把原因告诉我!
  • 发布日期:2021-09-28     信息来源:      浏览次数:141
    • 眼瞅着十一假期越来越近,原本计划做好实验放飞自我,数据却一直出不来,别人做蛋白纯化几天搞定,我做蛋白纯化只能靠手动,半个月反反复复结果依旧让人...
      只好请教老板,如何快速搞定蛋白纯化实验(文末有法宝,亲测管用!!!)

      我:「老师,我选择的是凝胶过滤色谱法,我的目标蛋白电荷密度并不高,上样的量也不大,但分辨率就是不高,而且有好多成分我还是想回收一下但做不到。 」

      老师:「分辨率不高这个问题,首先样品与洗脱料液比应该保持一致,其次要再检查一下色谱柱装填是否匀实了,这些都会影响分辨率。层析液全收集这个事儿是这样,咱现在的仪器通路是有限的,只能收集这么多,你就尽量挑你关注的来吧。」

       

       

      我:「行吧,那实验过程中会出现浑浊现象,这个是什么原因呢?」

      老师:「有可能是你实验的蛋白自身不稳定,需要检查缓冲体系是否适宜,环境是否温度太高,你可以加入肌氨酸钠,迅速使蛋白变性,浑浊现象会消除。」

       

       

      我:「老师,还有,还有问题,这个仪器镍柱好像堵了,每次开机要启动好久,基线还漂移的很过分,平衡的时间越来越久,一上午都耗在等机子上了。」

      老师:「这个机器的镍柱是刚换的,如果你样品杂质颗粒处理的比较好,液料比也合适的话,就要看纯化上清时蛋白质有没有产生絮状沉淀,尽快加入 DTT 还原。至于基线花长时间都不平的问题啊,同学们给我反映很多次了,但仪器用的太久了,我也很无奈。」

       

       

      我:「老师,我以前一直以为是我没有找到软件,怎么自动换算 AU 值,结果发现大家都是手动自己算的。」

      老师:「咱的这台仪器都『老当益壮』这么久了,电脑也卡,启动也慢,啥都得手动,但是换一台全自动进口的实在是太贵,公共实验室地方紧紧巴巴,便宜一点的吧,全是手动也不划算,跟学院申请了很多次了,经费也有限,确实挺为难的。」

       

       

      我:老师还是厉害啊,但是 3 天要搞定实验,实在有点为难,要如何才能搞定呢?

      老师:虽然我平时扣扣搜搜的,那也是没办法,这次我给你们特别准备了一台全自动蛋白纯化仪,完全满足你们日常使用,胜任常规蛋白纯化~

       

       

      我:全自动!!!

      老师:你赶紧扫下二维码去试用吧,用的好就买,这台仪器费用还可以,为师还有些经费能支持。
       

       这台能入我老板法眼的蛋白纯化仪究竟有何来历:

      Blupadstart 蛋白纯化系统,小巧紧凑的一体化设计,能够开展各种常用的纯化技术,如亲和层析、离子交换层析、脱盐和缓冲液交换,以及凝胶过滤,通过 Blupadstart、预定义模板或自定义方法实现全自动多蛋白纯化,操作界面简洁,流程直观,满足科研需求的同时让一切简单起来:

      • 开机即可检测:紧凑型一体机,配备高清 10.1 寸触摸屏点击运行,开机基线即可平衡,无需预热;

      • 检测灵敏:标配 260/280 mm 固定波长,5 万小时寿命 LED 冷光源,步进电机程序控制检测系统;

      • 软件功能强大:中英文操作界面可互换,UV、梯度谱线、温度电导率、收集试管号同屏幕显示,可实时监测,范围广、精度高,并可进行补偿;

      • 独立运行的馏分收集器:XY 轴模式,支持全收,按峰收集,美国进口进样阀和三通收集阀,支持 Load、Inject、Waste 功能;

      • 实时修改运行参数:高精度恒流泵系统,可提供连续、稳定的精准流速(流速范围 0.1~10 mL/min,最大耐压压力 3bar),支持实时在线修改梯度和流速;

      • 兼容所有层析填料Size Exclusion(SEC)-分子筛、凝胶过滤,(HIC和RP)-疏水和反相均可适应

      • 数据实时保存:实验数据支持 Excel 导出,实时自动保存,可防止意外断电导致的数据丢失。

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