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分子筛(凝胶过滤层析)蛋白纯化系统的优缺点
  • 发布日期:2021-04-22     信息来源:      浏览次数:71
    • 那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于分子筛(凝胶过滤层析)蛋白纯化系统的优缺点:

       

      分子筛定义:

       

      分子筛层析,又称为凝胶过滤层析或体积排阻层析。分子筛层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶作为固定相,对混合物中各组分按分子大小进行分离的层析技术。具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。

       

      避开原因一:工艺放大困难

      分子筛层析无法遵循线性放大原则,即使遵循柱床高度不变的原则,工艺流速如何进行调整,也是需要面临的问题。为保证良好的分离效果,分子筛层析需要求相对较高的装填高度,然而装填高度偏高,反压也势必会偏高。由于层析填料的耐压有限,在保证不超压的前提下,工艺流速会明显受限,这会使得整个纯化过程时间漫长。

       

      避开原因二:层析柱装填困难

      在进行层析柱装填时,匀浆液浓度需要在一定的范围内(50%-70%),方可保证沉降均匀、柱效良好,这对层析柱的规格选型有着特殊要求。高度100 cm的层析柱,在匀浆浓度50%-70%时,假设压缩系数为1.15,则实际使用高度为43.5-60.9 cm,这往往无法达到某些使用者的要求。若选配装柱器,并考虑柱头所占空间,这要求实验空间需高度充足。若考虑将2根层析柱串联使用,则要求2根层析柱的柱效相当,才可保证分离效果良好,这对装填技术也有着较高要求。

       

      避开原因三:测定柱效困难

      常规柱效测定方法,要求平衡1.5-2 CV,进样后,洗脱至出峰(参考值:2 CV),流速30 cm/h。若假设装填高度为60 cm,平衡、洗脱体积总计3.5 CV,经计算,测定一次柱效,需耗时7小时。可以想象,当发现柱效不理想,需要重新装填并测定柱效时,过程是很繁琐、耗时的。

       

      避开原因四:维护保养操作困难

      当层析柱使用完毕,用20%乙醇保存时,同样也很耗时。而且当再次使用时,用水将20%乙醇置换走,一般需要3 CV以上,而且由于该过程反压较大,通常还需要降低流速进行。

       

      总之,采用分子筛层析,各个环节都很繁琐、耗时,因此,在进行层析工艺设计时,要尽量避开分子筛层析。

       

      以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于分子筛(凝胶过滤层析)蛋白纯化系统的优缺点。

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