网站首页  ◇  技术支持  ◇  核酸鉴定方法之浓度
核酸鉴定方法之浓度
  • 发布日期:2018-03-06     信息来源:      浏览次数:950
    • 核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要,因此,对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。本文简单的回顾学习一下核酸鉴定的方法。
      核酸鉴定包括:浓度/纯度鉴定+完整性鉴定
       
      1.浓度/纯度鉴定
       
      (1)紫外分光光度计:
      原理:由于核酸中的碱基都具有共轭双键,所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线,其吸收高峰在260nm处,吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处,所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。

      由于核苷酸zui大吸收波长为260nm,根据朗伯-比尔定律可计算出在波长260nm的紫外线下,1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA, 40µg/ml的单链RNA。紫外分光光度法只适用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。
       
      计算公式:
      dsDNA(µg/µl)=OD260x50x稀释倍数/1000
      RNA(µg/µl)=OD260x40x稀释倍数/1000
       
      纯净的DNA OD260/OD280=1.8,制备的样品DNA比值在1.7-1.9,若洗脱时不使用洗脱缓冲液而使用去离子水,比值会偏低,因为PH值和离子存在会影响光的吸收值。

      当OD260/OD280< 1.7,表明蛋白质含量较高,可用利用酚、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀去除。
      当OD260/OD280> 2.0,表明RNA含量较高。可用RNaseA消化后再进行纯化。
      OD260/OD230的值,一般不小于2.0,若小于2.0,表明有碳水化合物、盐类或有机试剂污染。
       
      上海嘉鹏科技有限公司专业生产:紫外分析仪、三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、暗箱三用紫外分析仪、暗箱紫外分析仪、手提式紫外分析仪、三用紫外分析仪暗箱式、紫外检测仪、部分收集器、恒流泵、蠕动泵、凝胶成像系统、凝胶成像分析系统、化学发光成像分析系统、光化学反应仪、旋涡混合器、漩涡混合器、玻璃层析柱、梯度混合器、梯度混合仪、核酸蛋白检测仪、玻璃层析柱、荧光增白剂测定仪、馏分收集器、切胶仪、蓝光切胶仪、层析系统等产品。咨询。

    在线客服
    在线客服
    扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
    访问手机站