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多肽纯化的多种问题解答
  • 发布日期:2018-01-12     信息来源:      浏览次数:1931
    • 1. 多肽含量与多肽纯度有什么区别?
      一条多肽产品中除了多肽本身还包括生产过程中带入的水份及有机盐分等杂质,多肽纯度仅指多肽本身所含肽产品的含量及杂质的含量,不包括水份等杂质;而多肽含量则是指目标多肽在产品中的净含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法来检测;因此一条多肽即使纯度达到99%,因为产品中还包含水份及有机盐分等,它的含量可能也只有70-80%。
      2. 如何选择纯化过程中使用的色谱柱填料?
      不同序列的多肽理化性质及疏水性有很大的区别,多数情况分子量小于4000和亲水性多肽用C18柱分离效果zui佳,分子量大于5000和极端疏水性的多肽以C4柱分离效果zui佳,而C8柱介于C18和C4柱之间,其应用效果与C18柱更相似;对一些特殊选择性的多肽,也可选择苯基柱和聚合物色谱柱。
      3. 在纯化过程中选择聚合物填料的原则是什么?
      需要使用高于正常pH或温度条件进行纯化时,可以使用pH范围极宽的聚合物色谱柱,它的优点就是在极端pH条件下不会降解,可以使用强酸和强碱作为流动相进行分离纯化。
      4. 影响多肽纯度检测结果的因素
      影响多肽纯度检测结果的因素很多,主要包括:流动相体系、色谱柱型号、柱温、波长及色谱仪的性能指标,每一项不同都可能造成结果产生误差。
      5. 反相色谱分离纯化后,怎样去除产品中流动相产品中的TFA,乙腈等杂质?
      冻干的办法应该可以除去大多数TFA和乙腈,只要不超过允许范围,这种办法是zui简单、有效的。对TFA含量要求更高的一些药物肽冻干的方法一般无法完全达到要求,需要进行专门的转盐或脱盐。 
      6. 多肽一般有哪几种盐的形式?通过什么方式转盐或脱盐?
      多数多肽都是在TFA体系下分离纯化的,所以多肽以TFA盐的形式zui多,其次药物肽一般有醋酸盐及盐酸盐的形式,极少数药物肽会有一些特殊的盐形式。转盐方式多为离子交换法和HPLC法,而脱盐可用透析袋和超滤膜。
      7. TFA在缓冲液中是不是只起到调节PH的作用?TFA的浓度越高基线漂移越厉害,那是不是说TFA的浓度在缓冲液PH允许的情况下越低越好?
      (1)TFA起到类似离子对的作用,一般浓度在0.05-0.1%,过高的浓度,会使溶液偏酸,长时间使用可能影响柱子寿命。
      (2)同时TFA可以抑制硅胶表面硅醇基,改善碱性化合物的峰型。有时0.1%TFA分离不好的话。可以考虑加大浓度到0.2%。但要注意用完后及时冲洗色谱柱。
      (3)走梯度时,因为走成基线漂移,但对制备的影响不大。

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