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浅谈层析实验中的气泡问题(二)
  • 发布日期:2022-06-24     信息来源:      浏览次数:42
    • 那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下浅谈层析实验中的气泡问题(二):

             说到气泡,你可能会联想到酣畅淋漓的可乐,通透上头的啤酒,亦或是流光飞舞的浪漫,生活中的气泡,似乎还带有那么一丝美好,然而对于实验来说,尤其是在大多不会配置在线脱气单元的FPLC系统上做的层析实验,气泡就如烦人的苍蝇,鞋里的石子,令人如鲠在喉不吐不快,如若是重要样品、昂贵填料,气泡带来的实验失败那简直是小型灾难现场。那么气泡是源自何来,而又去之何处,怎么能让它们从我们的系统里消失,以下此篇,做一个小小探讨,抛砖引玉,共谋对策而灭之。


      关于气泡来源,正如病从口入,无非就是进入系统的开口处:流动相,或者流路中相对负压处的漏点;如果流动相脱气不理想或仪器本身连接管路、组件存在问题,流路中将形成肆意妄为的气泡,引发一系列问题: 

            1. 组分峰面积变化,峰形变化;
            2. 形成尖峰或锯齿状噪声;
            3. 出现鬼峰 ,基线漂移波动增大;
            4. 泵动作失常,压力波动,检测基线全抖;
            5. 填料走空,干柱;
            6. 溶解氧可能氧化样品组分和(或)流动相及固定相组分,使检测失真。

      实际案例



      Fig.1 气泡造成的UV杂峰

      Fig.2 气泡造成的系统压力波动


      这些症状基本能覆盖大部分的层析实验问题,可见气泡的破坏力和恼人程度,知己知彼方才能有的放矢,那么气泡是如何形成的呢?流动相中气体形成的原因有多种,*根本的还是由于气体在液体中达到过饱和状态;平衡状态时溶解空气的量与溶液的性质、气体的种类有关,也与外界条件有关, 主要的外界条件有以下 3 种。





      气体的分压增高,气体在溶剂中的溶解量增大,相反在较高压力下达到饱和的溶液,一旦压力降低便会产生气泡。这也是实验中气泡产生的重要原因之一,如:


      ● 层析仪的缓冲进口一般都有滤网设计,如果滤网维护清洁不到位,滤网杂质过多或者长菌造成液体通量不足,在较高的流速情况下,管路内部的压力急剧降低,此时气泡将会闪亮登场,带来波浪般的图谱波动;因此实验之前需要检查系统缓冲液进口滤头的清洁情况,如有杂质需立刻清洗去除。


      Fig.3 缓冲液进口滤头筛网

      ● 配置缓冲液时的气压高(气温,湿度,天气和海拔都会影响大气压),瓶子拧紧后保存,如果实验时的气压有变化,在打开缓冲液进行实验时,就会带入析出的气泡,因此,预配置缓冲液的脱气就非常重要。
      ● 系统中的不同管径流路的转换,带来通量的改变,比如细管转粗管,在高流速情况下,由于通量的骤升,形成局部负压,容易引发气泡的析出或漏入,所以系统管径的使用要尽量避免细管转粗管,如果实验必须,则要注意避免使用高流速。
      ● 低压梯度时,由于低压梯度单元部位的压力略低于大气压,且混合室多装在泵后(高压侧),但实际混合在低压侧就开始了,所以,低压梯度比混合发生在泵后的高压梯度容易产生气泡。(常规单泵二或四通道的均为低压混合模式)
      ● 色谱柱中的压力一般较高,气体溶解度增大,一般在柱中不易产生气泡。然而,在接近柱的出口处,压力相对较低,柱体填料的进出口压差会很大,此时流动相里溶解的气泡由于压力差,极易在填料中析出,影响柱效,甚至损坏填料,因此系统里会配置反压装置(如背压阀),给柱后施加一定的反压,降低柱内压差,从而避免气泡的析出。

      以上就是上海嘉鹏科技仪器有限公司为大家整理总结关于浅谈层析实验中的气泡问题(二)。
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