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wb成像系统在wb实验中该如何使用?你知道吗?
  • 发布日期:2020-03-11     信息来源:公司新闻      浏览次数:1410
    •    wb成像系统在wb实验中该如何使用?你知道吗?

        wb成像系统是否能够拍摄到ECL的图像主要取决于设备是不是带有制冷的CCD,只有制冷的CCD才够灵敏地捕捉到膜上发出的光。随着Cooled-CCD技术的发展,成像系统成本越来越低,因而在现在的实验室里这些设备越来越普遍。本实验室目前采用的是wb成像系统,具有灵敏度高,成像速度快、成像效果清晰等优点。
        wb成像系统仪器的使用非常简单:
        1)在使用前开机预冷,待仪器温度降到-20℃才可以进行检测;
        2)将化学发光检测试剂盒中的A和B按照1:1混合;
        3)PVDF膜正面朝上放于暗箱,用移液枪将发光液均匀地涂在膜上,关闭暗箱箱门,进行曝光;
        4)曝光可以自动曝光,也可手动曝光,一般先点击自动曝光,观察成像效果,若不理想可再手动调节曝光时间;
        5)外wb成像系统还具有多张拍摄模式,可将一张膜在不同的曝光时间下连拍6张,使曝光更方便。内参一般显影15s(影像条带粗细深浅一致说明内参已调齐),内参好说明各步实验操作均无误,即可进行后续的目的蛋白检测,目的蛋白结果的好坏就取决于其表达量以及抗体的特异性和效价了。
        6)与X胶片相比,wb成像系统具有瞬时影像处理、立即输出、不需要胶片处理装置及暗室等成本花费、可用软件半定量分析等优点,因而在现在的实验室里wb成像系统的使用已经逐渐取代传统的暗室压片曝光检测。
        wb成像系统在一般的wb检测过程中,都会有膜的封闭、一抗孵育、二抗孵育和底物显色这四道“加工”工序。wb显色的方法主要有放射自显影、底物化学发光ECL、底物荧光ECF和底物DAB呈色四种方法,运用到实验中包括:
        1、发表文章通常是用底物化学发光ECL,操作比较简单,只需要购买现成的化学发光检测试剂盒即可。
        2、试剂盒中一般使用的反应底物A和B分别是鲁米诺(又名发光氨) 和过氧化氢,原理如下(二抗用HRP标记):在HRP的催化作用下,鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物,过氧化物不稳定随即分解,形成一种能发光的电子激发中间体,当后者由激发态返回至基态,就会产生荧光,可用X胶片和成像设备进行检测。
        3、使用传统的X胶片显影方法进行wb实验时,最后需要使用暗室曝光来进行ECL检测,但是建造暗室浪费空间,在暗室中曝光步骤繁琐,冲洗X光片时会接触有毒的化学药剂。
        4、wb成像系统能够对ECL发光直接成像,获得实验结果,避免暗室曝光的不便。

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