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大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶联mianyi检测试剂盒使用说明书
  • 发布日期:2019-06-21     信息来源:      浏览次数:345
    • 使用前仔细阅读本说明书。本酶联mianyi试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠Wnt2B,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
      用    途用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中Wnt2B测定。
      工作原理
         本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联mianyi吸附法(ELISA)测定样品中大鼠Wnt2B水平。向预先包被了大鼠Wnt2B单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠Wnt2B,温育;温育后,加入生物素标记的抗Wnt2B抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成mianyi复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠Wnt2B的浓度呈正相关。
      试剂盒组成

      试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
      说明书1份1份 
      封板膜2片(48)2片(96) 
      密封袋1个1个 
      酶标包被板1×481×962-8℃保存
      标准品160ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
      标准品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
      链霉亲和素-HRP3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
      生物素标记的抗WNT2B抗体0.5ml×1瓶1 ml×1瓶2-8℃保存
      显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
      显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
      终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
      浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

       
      需要而未提供的试剂和器材

      1. 37℃恒温箱。
      2. 标准规格酶标仪。
      3. 精密移液器及一次性吸头
      4. 蒸馏水,
      5. 一次性试管
      6. 吸水纸

       
      注意事项

      1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
      2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
      3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
      4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
      5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
      6. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

       
      洗板方法
      手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
       
      自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
      标本要求
      1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
      2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
      操作程序

      1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
      80ng/L5号标准品120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液
      40ng/L4号标准品120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液
      20 ng/L3号标准品120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液
      10ng/L2号标准品120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液
      5 ng/L1号标准品120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液

       
        2.根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
        3.加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗WNT2B抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)代测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗WNT2B抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。
        4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
        5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
       6.显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
       7.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
       8.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
       9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 
       
      操作程序总结:


      试剂盒性能:

      1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
      2.批内与批间应分别小于9%和15%
       检测范围:
      检测范围:2ng/L -90ng/L
       保存条件及有效期:
       保存:2-8℃。
      有效期:6个月(2-8℃)。

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